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可用于各种羧基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖)的氨基活化偶联介质(EAH-activated)
发布时间:2021-06-17     作者:AXC   分享到:

氨基活化偶联介质可用于各种含有羧基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖等)的偶联,广泛广泛。EAH-activated QZT4FF活化偶联介质以高流速琼脂糖凝胶为基质,经过一系列的活化步骤,最终形成活化氨基,在温和的条件下就可以偶联各种带羧基的配基。EAH-activated QZT4FF活化介质具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广的特点。

氨基活化介质的理化性质和产品特性如表1所示。

image.png

氨基活化偶联介质(EAH-activated)的应用

EAH-activated活化偶联介质广泛用于各种含有氨基的亲和配基(蛋白质、多肽、糖等)的偶联。具体的操作步骤如下(以4 ml活化胶偶联BSA为例):

1)将约4 ml EAH活化胶水洗3-5次后抽干,再用pH 4.5的稀HCl溶液清洗2次,抽干后将4 ml EAH活化胶(约3.0 g)加入到10 ml的反应器(磨口三角瓶或离心管)中,备用。


2)准确称取40 mg BSA溶于4.0 mlHClpH 4.5溶液,溶解完全后加入84 mg EDC.HCl,溶解完全后测量其pH是否为4.5,否则需调到4.5,备用。


3)将BSA溶液加入到活化胶中,反应温度恒定在425,摇床中振荡混合(离心管水平放置),转速120 rpm,反应时间24 h(反应前1小时pH有明显的下降,可在15304560 min时测量pH并加入适量0.1M NaOHpH4.5)。


4)反应停止后,静置,取上清离心(1000 g5 min,室温),收集上清液用于未偶联BSA的浓度分析,计算偶联的BSA的配基密度;将其余料液转移到G3砂芯漏斗中用去离子水清洗、抽干。


5)封闭未反应的EAH:一般不需要封闭,如需封闭未反应的氨基,可在偶联反应后(注意是在清洗前)直接往反应物中加入4.2 ml 1 M 乙酸(醋酸),继续反应4 h。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干,用去离子水清洗。


6)清洗

将制得的BSA琼脂糖凝胶依次用5倍的去离子水、0.1 M 0.5 M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)、去离子水、0.1M 0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液(pH 8.0)和去离子水充分洗涤(重复清洗3次),抽干,去除未反应的配基。


7)保存

制得的BSA亲和介质保存于4℃20%乙醇溶液中。

备注:其他配基的偶联方法与BSA类似,但反应条件(温度(4 oC至室温)、时间(4-24 h)、配基加入量)需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。


注意事项:通常用稀盐酸作为偶联溶液,如果选用缓冲液要避免使用含有氨基、羧基、磷酸基的缓冲液。

西安齐岳生物提供各种含有氨基的小分子peg linker产品:

Amino-PEG3-amine cas:929-75-9

Amino-PEG4-amine cas:68960-97-4

Amino-PEG5-amine cas:72236-26-1

Amino-PEG6-amine cas:76927-70-3

Amino-PEG7-amine cas:332941-25-0

Amino-PEG8-amine cas:82209-36-7

Amino-PEG9-amine cas:474082-35-4

Amino-PEG10-amine cas:928292-69-7

Amino-PEG11-amine cas:479200-82-3

NHBoc-PEG3-amine cas:101187-40-0

NHBoc-PEG4-amine cas:811442-84-9

NHBoc-PEG5-amine cas:189209-27-6

NHBoc-PEG6-amine cas:1091627-77-8

NHBoc-PEG7-amine cas:206265-98-7

NHBoc-PEG9-amine cas:890091-43-7

NHBoc-PEG11-amine cas:890091-42-6

NHBoc-PEG2-amine cas:153086-78-3

Azido-PEG1-methylamine cas:1835759-88-0

Azido-PEG23 amine cas:749244-38-0

Azido-PEG11-amine cas:1800414-71-4

Azido-PEG9-amine cas:1207714-69-9

Azido-PEG10-amine cas:912849-73-1

Azido-PEG7-amine cas:1333154-77-0

Azido-PEG8-amine cas:857891-82-8

Azido-PEG5-amine cas:516493-93-9

Azido-PEG6-amine cas:957486-82-7

Azido-PEG4-amine cas:951671-92-4

Azido-PEG1-amine cas:464190-91-8

Azido-PEG2-amine cas:166388-57-4

Azido-PEG3-amine cas:134179-38-7

AMINE-PEG4-OH cas:86770-74-3

H2N/Amino-PEG2-COOH cas:791028-27-8

H2N/Amino-PEG3-COOH cas:784105-33-5

H2N/Amino-PEG4-COOH cas:663921-15-1

H2N/Amino-PEG5-COOH cas:1191078-74-6

H2N/Amino-PEG6-COOH cas:905954-28-1

H2N/Amino-PEG8-COOH cas:756526-04-2

H2N/Amino-PEG9-COOH cas:1191079-83-0

H2N/Amino-PEG10-COOH cas:196936-04-6

H2N/Amino-PEG12-COOH cas:196936-04-6

H2N/Amino-PEG7-COOH cas:

H2N/Aminooxy-PEG3-acid HCl salt cas:1807540-79-9

H2N/Aminooxy-PEG4-acid cas:1807537-38-7

H2N/Aminooxy-PEG2-alcohol cas:185022-12-2

H2N/Aminooxy-PEG4-alcohol cas:106492-60-8

H2N/Aminooxy-PEG2-methane cas:54149-49-4

H2N/Aminooxy-PEG7-methane cas:1370698-27-3

H2N/Aminooxy-PEG8-methane HCl salt cas:2055024-52-5

H2N/Aminooxy-PEG3-t-butyl ester cas:1835759-72-2

H2N/Aminooxy-PEG4-t-butyl ester cas:2100306-82-7

H2N/Aminooxy-PEG3-methane cas:248275-10-7

H2N/Aminooxy-PEG3-thiol HCl salt cas:1200365-63-4

H2N/Aminooxy-PEG3-NH-Boc cas:2062663-65-2

Aminooxy-PEG2-azide cas:1043426-13-6

Aminooxy-PEG4-azide cas:2100306-61-2

温馨提示:西安齐岳生物科技有限公司供应的产品仅用于科研,不能用于其他用途


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