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红细胞膜囊泡负载黑磷量子点(BPQD-EMNVs)的制备及动物体内治疗实验研究介绍
发布时间:2021-05-06     作者:axc   分享到:

黑磷是一种新型非金属层状半导体二维材料,具有从紫外到近红外的宽吸收光谱。 研究人员已对不同厚度和大小的黑磷进行了生物成像和光热治疗研究,红细胞膜作为一种良好的纳米药物载体, 具有延长体内循环时间、安全无毒和生物相容性好等特点 ,得到了研究人员的广泛关注。 本研究采用红细胞膜作为载体, 将 BPQD 载入其中,制备负载黑磷量子点 BPQD 的红细胞膜纳米囊泡(BPQD-loadederythrocyte membrane nanovesicles,BPQD-EMNVs),并对其理化性质和抗肿瘤作用进行研究, 以期为癌症治疗提供一种新的策略。

一、黑磷量子点(BPQD)的制备:

取 20 mg 黑磷晶体,加入 5 ml NMP 于研钵中研磨至液体颜色发黑浑浊,然后将其转入圆底离心管中定容至 40 ml。 将离心管置于冰浴中,采用细胞超声破碎仪进行超声,功率为 500 W,超声振幅为 30%,超声 5 s, 间歇 5 s, 连续超声 8 h。 接着进行水浴超声,功率为 300 W,超声振幅为 80%,超声 8 h。 超声后将样品 6 000× g 离心 30 min,缓慢吸取上清,继续27 000× g 离心 1.5 h, 缓慢吸弃上清, 取沉淀, 保存于 NMP 中防止降解。

二、红细胞膜的提取:

ICR 雌性小鼠于动物室内分笼饲养, 室内温度为(21±2) ℃, 相对湿度为 30%~70%, 光照 12 h, 自由饮食进水。 选取 6~8 周龄 ICR 雌性小鼠 10 只,眼球摘除取血,装入经肝素钠预先淋洗过的 EP 管中;4 ℃、1 200× g 离心 10 min,小心去除白细胞血清层;加入预冷磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS), 清洗红细胞 2 次; 加入与红细胞等体积的预冷 PBS,4 ℃、1 200× g离心 10 min,小心去除PBS;配制 20 ml 预冷的 0.25×PBS(低渗液), 将其与红细胞按体积比 2∶1 混合, 反复吹打数次置于冰上, 冰浴2 h, 期间每 0.5 小时吹打几次;4 ℃、7 800× g 离心10 min, 去除血红蛋白,EP 管底部粉红色沉淀即为红细胞膜,置于-20 ℃冰箱保存。

三、红细胞膜囊泡负载黑磷量子点(BPQD-EMNVs)的制备

将含有 BPQD 的 NMP 液体以 27 000× g 离心1.5 h,去除 NMP;然后加入适量质量浓度为 9 g/L 的NaCl 溶液重悬、吹打分散均匀;加入适量红细胞膜溶液,水浴超声 5 min(300 W、4 000 Hz、100%功率),即可获得 BPQD-EMNVs。

如图 1 所示,制备的 BPQD鄄EMNVs 在透射电子显微镜下呈规则的球形结构,粒径约 200 nm(图 1A),而用纳米粒度及 Zeta 电位仪测得 BPQD-EMNVs 的

平均粒径为 228 nm(图 1B),两者结果基本一致。

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 如图 2 所示,随着 BPQD 质量浓度的增加,BPQD 的包封率逐渐增加; 当 BPQD 质量浓度增至 100 mg/L时, 包封率几乎不再增加, 因此 BPQD鄄EMNVs的 BPQD 包封率约为 47%。

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四、细胞摄取实验

将红细胞膜和 BPQD 分别用 cy5.5 和异硫氰酸荧光素进行荧光标记, 然后按 1.2.3节方法制备BPQD鄄EMNVs。 将小鼠乳腺癌细胞 4T1 以 1×10 5 个/孔接种于 12 孔板中,加入荧光标记的 BPQD鄄EMNVs,于 37 ℃培养箱中孵育 2 h; 去除培养基, PBS 洗3 次, 用质量浓度为 40 g/L 的多聚甲 醛溶液固定10 min;再用 4',6鄄二脒基鄄2鄄苯基吲哚对细胞核进行染色,置于激光扫描共聚焦显微镜下观察拍照。

采用激光扫描共聚焦显微镜观察小鼠乳腺癌细胞 4T1 对 BPQD鄄EMNVs 的摄取情况,结果如图 3所示, 蓝色荧光为细胞核, 在细胞核周围有许多紫色荧光, 即被肿瘤细胞摄取的 EMNVs, 绿色荧光为 EMNVs 内的 BPQD, 该结果表明BPQD 可通过EMNVs 被肿瘤细胞摄取。

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五、红细胞膜囊泡负载黑磷量子点(BPQD-EMNVs)在肿瘤部位富集

如图 4 所示, 通过尾静脉注射荧光标记的BPQD-EMNVs 后,4T1 荷瘤 Balb/c 小鼠肿瘤部位的荧光强度随着时间的增加而增强, 在 4 h 时荧光强度大, 随后荧光强度渐渐变弱, 表明在注射 4 h后,BPQD鄄EMNVs 在肿瘤部位的富集程度高。

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六、动物体内治疗实验

4T1 荷瘤 Balb/c 小鼠分别注射 PBS、EMNVs、BPQD 和 BPQD-EMNVs 4 h 后, 用 808 nm 近红外光对小鼠的肿瘤部位进行照射。 图 5 为热成像仪记录的肿瘤部位温度随照射时间的变化曲线, 可以看出照射 10 min 后,PBS 和 EMNVs 组小鼠肿瘤部位的温度无明显变化,上升了 2~3 ℃,而 BPQD 组小鼠肿瘤部位的温度可升至 43 ℃左右,这可能是由于部分BPQD 聚集至肿瘤部位所致。 温度上升大的为BPQD-EMNVs 组, 小鼠肿瘤部位的温度可达 53 ℃左右, 该温度已满足杀死肿瘤细胞的条件, 这也表明 BPQD 可通过 EMNVs 到达肿瘤部位并在肿瘤部

位有效富集;与 BPQD 组相比, 以 EMNVs 作为载体可大大提高 BPQD 在肿瘤部位的富集程度。

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西安齐岳生物供应黑磷纳米片(BPNSs)、黑磷烯纳米带(PNR)、黑磷量子点(BPQDs)、黑磷纳米颗粒BPNPs、黑磷纳米管、黑磷薄膜、黑磷晶体、黑磷纳米条阵列等等产品,产品目录如下:

黑磷量子点/碳化钛纳米片复合材料(TiC/BPQDs)

黑磷量子点/石墨相氮化碳复合光催化剂(g-C3N4/BPQDs)

黑磷量子点/铂杂化介孔二氧化硅纳米颗粒

黑磷量子点负载镍催化剂

黑磷量子点/碳化钛纳米片复合材料(TiC/BPQDs)

黑磷烯量子点石墨烯纳米片三维复合材料

黑磷量子点/凹凸棒纳米复合材料

脂质体负载黑磷量子点(liposome-BPQDs)

二氧化钛/黑磷量子点复合材料(TiO2/-BPQDs)

硫铟锌/黑磷量子点

羟基化黑磷量子点水基溶液

聚乙二醇PEG修饰黑磷量子点(PEG-BPQDs)

石墨烯/黑磷量子点/含磷离子液体复合气凝胶

磷酸化纤维素纳米纤维/黑磷量子点复合阻燃薄膜

石墨烯/黑磷量子点/含磷离子液体复合气凝胶

石墨烯/黑磷量子点/含氮离子液体复合气凝胶

黑磷烯量子点修饰石墨烯薄膜

黑磷量子点掺杂氧化锌纳米棒(BPQDs/ZnO NRs)

红细胞膜囊泡负载黑磷量子点(BPQD-EMNVs)

黑磷烯量子点-石墨烯纳米片三维复合材料

人血清白蛋白修饰黑磷量子点(HSA-BPQDs)

石墨烯/黑磷量子点/含硫离子液体复合气凝胶

万古霉素修饰黑磷量子点抗菌剂

黑磷量子点修饰还原氧化石墨烯(rGO@BPQDs)

癌细胞膜囊泡负载黑磷量子点(BPQD-CCNVs)

黑磷量子点/碳化钛纳米片复合材料(BPQDs/Ti3C2)

银纳米簇/黑磷量子点双掺杂金属有机骨架MOF复合物(AgNCs/BPQDs/MOF)

黑磷量子点双掺杂金属有机骨架MOF复合物(BPQDs/MOF)

黑磷量子点掺杂纳米氧化锌复合材料(BPQDs@ZnO)

黑磷量子点包覆PMMA纳米纤维薄膜

BPQDs/PMMA复合纳米纤维薄膜

人血清白蛋白修饰黑磷量子点

红细胞膜纳米囊泡负载黑磷量子点(BPQD-EMNVs)

碳量子点修饰黑磷量子点纳米粒子材料

万古霉素修饰黑磷量子点抗菌剂

二氧化钛/黑磷量子点复合材料

羟基化黑磷量子点水基溶液

零维黑磷量子点/一维管状氮化碳复合光催化剂

黑磷量子点/凹凸棒纳米复合材料

硫铟锌/黑磷量子点

黑磷量子点/铂杂化介孔二氧化硅纳米颗粒

石墨烯/黑磷量子点/含硫离子液体复合气凝胶

PLGA掺杂黑磷量子点BPQD

黑磷量子点负载镍催化剂

石墨烯/黑磷量子点/含磷离子液体复合气凝胶

带隙可调的黑磷量子点光催化剂

黑磷量子点光敏剂

黑磷烯量子点-石墨烯纳米片三维复合材料

黑磷改性聚酰亚胺复合材料(PAA/BPQD)

磷酸化纤维素纳米纤维/黑磷量子点复合阻燃薄膜



温馨提示:西安齐岳生物科技有限公司供应的产品仅用于科研,不能用于其他用途

















【公司简介】:

德尔塔(Delta) 是西安齐岳生物科技有限公司旗下品牌,德尔塔(Delta) 目前经营的产品主要有合成磷脂,PEG衍生物,嵌段共聚物,纳米金,磁性纳米颗粒,介孔二氧化硅,活性荧光染料,荧光量子点,点击化学和大环配体等等,这些产品在国内给数百家高校实验室和数十家中科研研究所及药厂长期供应,德尔塔(Delta) 成立之初以代理国外进口品牌的为主,产品主要涉及磷脂、PEG衍生物等产品,随着公司的发展和扩大,公司更注重自主品牌的建立和高附加值的高端产品研发并且注册了自己品牌商标,在未来3-5年公司预计将建立一个综合型的大型实验室,该实验室不仅提供全方面的纳米靶向药物科研产品及定制外包服务,还将承接其他研究领域的科研产品和定制外包服务,预计该实验室还将与国内数十家大型药厂进行前期药物研发的科研合作,为药厂提供科研产品及技术服务,在研发阶段协助药厂开发抗肿瘤新药,一旦新药开发成功,在研发阶段积累的高端辅料产品和研发经验将支持我们建立一条药用辅料生产线给该肿瘤新药长期提供高端药用辅料。在高校和研究所科研领域上面公司不但要抢占国内市场还要开拓国际市场,国际业务以在2018年初开始启动,部分产品已远销欧美大陆,计划在未来3年-5年公司的拳头产品要抢占大量的国际市场,使得德尔塔(Delta) 品牌发展成一个国际品牌。

 

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德尔塔(Delta) 经营的产品种类包括有:合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、近红外荧光染料、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、点计化学产品、树枝状聚合物、环糊精衍生物、热门肿瘤原料药、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯,二氧化硅及介孔二氧化硅,聚合物微球,近红外荧光染料,聚苯乙烯微球,上转换纳米发光颗粒,MRI核磁造影产品,荧光蛋白及荧光探针等等。


【温馨提示】:

德尔塔(Delta)供应的产品仅用于科研,不能用于人体治疗、药物开发、和其他商业用途,如有购买方或第三方采购我公司的产品用于治疗、药物开发或商业用途,购买方或第三方将承担所有法律责任,我公司也将追究其法律责任。以上产品均可定购。


【运输说明】:


极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。

低温产品:低温产品运输过程中加装冰袋运输。

常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。


【目前合作的部分科研单位】:

重庆医科大学,西南大学,第三军医大学,西南交通大学,重庆大坪医院,四川大学,华西医院,电子科技大学,哈尔滨工业大学,吉林大学,长春应化所,沈阳药科大学,中国海洋大学,北京大学,清华大学,北京理工大学,北京师范大学,北京中医药大学,中国农业大学,北京市肿瘤防治研究所,北京军事医学科学院,中国科学院动物研究所,中国科学院化学研究所,第四军医大学,西安交通大学,湖南大学,中南大学,武汉大学,武汉协和医院,华中科技大学,中山大学,广东药科大学,深圳大学,华南理工大学,中国科研学院先进技术研究院,厦门大学,福州大学,浙江大学,南京大学,南京医科大学,东南大学,中国药科大学,苏州大学,山东大学,山东师范大学,上海交通大学,华东理工大学,复旦大学,郑州大学,河南烟草局,宁夏医科大学,新疆大学,中国人民大学,中国科学院苏州纳米研究所,国家纳米科学中心,武汉病毒研究所,中国科学院过程工程研究所,江苏省原子医学研究所,中国科学院宁波材料技术与工程研究所,中国科学院上海硅酸盐研究所,中国医学科学院生物医学工程研究所等等

 

【目前合作过的药厂】:

石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司,西安力邦制药有限公司,上海药明康德新药开发有限公司,安徽省国平药业有限公司,苏州亚盛药业有限公司,兆科药业(合肥)有限公司,南京绿叶制药有限公司,山东绿叶制药有限公司,大冢(上海)药物研究开发有限公司,国药集团化学试剂有限公司,长春金赛药业有限责任公司,成都苑东药业有限公司,浙江海正药业等。


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