您当前所在位置:首页 > 新品上市 > 实验室耗材 > 荧光标记
辣根过氧化酶、ECL、鲁米诺​和增强发光酶反应原理
发布时间:2021-01-26     作者:zzj   分享到:

辣根过氧化酶使试剂中的发光物(luminol)氧化并发光,而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中,将复杂的蛋白混合物经sds-page分离,并转移到固相膜上(如nc、pvdf)等,用于免疫学检测,经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接(标记一抗)或间接(标记二抗)反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后,luminol发生氧化降解,并发射波长为428nm的光,辣根过氧化物酶是一种含亚铁血红素的蛋白质,HRP广泛分布于植物界,它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白,糖含量18%。HRP由多个同功酶组成,Mr在40000左右,等电点7.2。溶于水,溶解度为5%(W/V),溶液呈棕红色,透明。


用途:非放射性发光系统,用于检测固定在膜上的蛋白,其敏感性达1-5pg。用x光片可快速地获得永久的硬拷贝结果。所含独特的底物足以维持12小时以上的发光,便于反复曝光操作,免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。适用于痕量蛋白或核酸检测。

image.png


ECL在化学领域,是一种化学发光试剂。electrochemiluminescence

化学发光试剂,一般是WesternBlot的最后一步,加入1:1的溶液A和溶液B,覆盖pvdf膜,可以显色来观察实验结果。

原理:一般使用的发光液A和B分别是鲁米诺和过氧化氢,在辣根过氧化物酶(HRP)的催化作用下,鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物,过氧化物不稳定随即分解,形成一种能发光的电子激发中间体,当后者由激发态返回至基态,就会产生荧光。

在发光过程中不需要消耗HRP,HRP只是起催化作用,所以只要HRP没降解失活,是可以重复加发光液的。但HRP作为一种蛋白酶,在室温放置时间过长,是会降解的;同时在发光过程中有什么物质(比如显影液)污染了膜的话,也有可能灭活膜上的HRP。


HRP 标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺(32氨基邻苯二甲酰肼,lum ino l) ,或其衍生物如异鲁米诺(42氨基邻苯二甲酰肼) , 是一类重要的发光试剂。其结构如图4 所示。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行,在过氧化物酶及活性氧[ 过氧化阴离子(O 2- ) , 单线态氧(1O 2 ) , 羟自由基(OH·) , 过氧化氢(H2O 2)]存在下,生成激发态中间体, 当其回到基态时发光, 其波长为425nm。

早期用鲁米诺直接标记抗原(或抗体) ,但标记后发光强度降低而使灵敏度受到影响。近来用过氧化物酶标记抗体, 进行免疫反应后利用鲁米诺作为发光底物, 在过氧化物酶和起动发光试剂(NaOH2H2O 2) 作用下, 鲁米诺发光, 发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。


增强发光酶免疫分析(enhanced luminescence enzyme immunoassay, ELEIA )在发光系统中加入增强发光剂, 如对2碘苯酚等, 以增强发光信号,并在较长时间内保持稳定, 便于重复测量, 从而提高分析灵敏度和准确性。在全自动分析仪上, 还可通过计算机严密控制, 进行自动操作, 如加试剂,混合, 温育, 洗涤, 加发光试剂, 发光计数, 数据处理, 绘制标准曲线, 直至完成病人血清样品的分析并打印出结果。Am erliteTM发光增强酶免分析系统用荧光素、噻唑等增强剂, 其发光时间可持续长达20m in, 试剂盒有甲状腺功能检测的促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素, 与性激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮, 以及其他方面的如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等。

ALP标记的CLEIA所用底物为环1, 22二氧乙烷衍生物, 这是一类很有前途的发光底物 ,用于化学发光酶免分析底物而设计的分子结构中包含起稳定作用的基团——金刚烷基, 其分子中发光基团为芳香基团和酶作用的基团,在酶及起动发光试剂作用下引起化学发光。经常使用的底物是AM PPD [ 32(2’2 spiroadam an2tane ) 42methoxy242( 3’2 phosphoryloxy) 2phenyl21,22dioxetane ], 中文名为: 32(2’2螺金刚烷) 242甲氧基242(3’2 磷酰氧基) 2苯基21, 22环二氧乙烷)。在碱性磷酸酶(AL P) 作用下,磷酸酯基发生水解而脱去一个磷酸基, 得到一个中等稳定的中间体AM PD (半寿期为2~ 30m in) ,此中间体经分子内电子转移裂解为一分子的金刚烷酮和一分子处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子, 当其回到基态时产生470nm 的光,可持续几十分钟。AM PPD 为磷酸酯酶的直接化学发光底物,可用来检测碱性磷酸酯酶或酶和抗体、核酸探针及其它配基的结合物。可检测到碱性磷酸酯酶的浓度为10- 15mol/L 。


我们可以提供的相关产品如下:

酰基辅酶A氧化酶
ACYL COENZYME A OXIDASE
61116-22-1
α-葡糖苷酶
EC 3.2.1.20
9001-42-7
果糖氨基酸氧化酶


嘌啉核苷磷酸化酶

9030-21-1
葡萄糖脱氢酶
EC 1.1.1.47
9028-53-9
丙酮酸激酶
pyruvate kinase
9001-59-6
胆固醇氧化酶(CONⅡ-FD)/胆甾醇氧化酶

Cholesterol oxidase
9028-76-6
胆固醇酯酶
CHOLESTEROL ESTERASE
9026-00-0
甘油激酶
Glycerol kinase
9030-66-4
谷氨酸脱氢酶(GLDH)
Glutamate Dehydrogenase
9029-12-3
核糖核酸酶/RNA酶

Ribonuclease A
9001-99-4
还原辅酶Ⅱ四钠盐(NADPH)/还原型辅酶II

Beta-NADPH tetrasodium salt
2646-71-1
肌氨酸氧化酶(SOD-TE)
Sarcosine oxidase
9029-22-5
辣根过氧化物酶/HRP-ELISA标记物

Horseradish Peroxidase
9003-99-0
尿酸酶
Uricase
9002-12-4
苹果酸脱氢酶(MDH)
Malate dehydrogenase
9001-64-3
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PDH)
Glucose-6-phosphate dehydrogenase
9001-40-5
葡萄糖氧化酶
Glucose oxidase
9001-37-0
3α-羟基类固醇脱氢酶(3α-HSD)/3ALPHA-羟基类固醇脱氢酶

3α-Hydroxysteroid Dehydrogenase
9028-56-2
溶菌酶/脆壁质酶
Lysozyme
12650-88-3
D-乳酸脱氢酶/乳酸脱氢酶

D-Lactate dehydrogenase
9028-36-8
神经氨酸苷酶
Neuraminidase from Clostridium perfringens (C. welchii)
9001-67-6
山梨酸
Sorbic acid
110-44-1
神经氨酸醛缩酶
N-Acetylneuraminic Acid Aldolase
9027-60-5
DNA酶/脱氧核糖核酸酶; 胰道酶; 去氧核糖核酸酶; 胰克氧核糖核酸酶; 除氧细胞核酸酶(牛胰); 去氧细胞核酸酶
Deoxyribonuclease
9003-98-9
腺苷脱氨酶(ADA)
Adenosine Deaminase
9026-93-1
beta-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐 (NADP-2Na)
beta-Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate disodium salt
24292-60-2
烟酰胺腺嘌呤双核苷酸(NAD)/ 二磷酸吡啶核苷酸 辅酶 1 辅酶 A 辅酶
beta-Diphosphopyridine nucleotide
53-84-9
胰蛋白酶(牛)250U/MG
Trypsin
9002-07-7
Beta-烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠(β-NADH)
Beta-NADH disodium salt
606-68-8
烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸盐(NADP),辅酶 II/氧化型辅酶II

beta-Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate
53-59-8
β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠盐(NADP-Na)
β-Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate sodium salt
1184-16-3
乙酰辅酶A合成酶
ACYL-COENZYME A SYNTHETASE
9013-18-7
脂肪酶(猪胰)
Lipase9001-62-1

以上内容来自小编zzj 2021.1.26




【公司简介】:

德尔塔(Delta) 是西安齐岳生物科技有限公司旗下品牌,德尔塔(Delta) 目前经营的产品主要有合成磷脂,PEG衍生物,嵌段共聚物,纳米金,磁性纳米颗粒,介孔二氧化硅,活性荧光染料,荧光量子点,点击化学和大环配体等等,这些产品在国内给数百家高校实验室和数十家中科研研究所及药厂长期供应,德尔塔(Delta) 成立之初以代理国外进口品牌的为主,产品主要涉及磷脂、PEG衍生物等产品,随着公司的发展和扩大,公司更注重自主品牌的建立和高附加值的高端产品研发并且注册了自己品牌商标,在未来3-5年公司预计将建立一个综合型的大型实验室,该实验室不仅提供全方面的纳米靶向药物科研产品及定制外包服务,还将承接其他研究领域的科研产品和定制外包服务,预计该实验室还将与国内数十家大型药厂进行前期药物研发的科研合作,为药厂提供科研产品及技术服务,在研发阶段协助药厂开发抗肿瘤新药,一旦新药开发成功,在研发阶段积累的高端辅料产品和研发经验将支持我们建立一条药用辅料生产线给该肿瘤新药长期提供高端药用辅料。在高校和研究所科研领域上面公司不但要抢占国内市场还要开拓国际市场,国际业务以在2018年初开始启动,部分产品已远销欧美大陆,计划在未来3年-5年公司的拳头产品要抢占大量的国际市场,使得德尔塔(Delta) 品牌发展成一个国际品牌。

 

【经营种类】:

德尔塔(Delta) 经营的产品种类包括有:合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、近红外荧光染料、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、点计化学产品、树枝状聚合物、环糊精衍生物、热门肿瘤原料药、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯,二氧化硅及介孔二氧化硅,聚合物微球,近红外荧光染料,聚苯乙烯微球,上转换纳米发光颗粒,MRI核磁造影产品,荧光蛋白及荧光探针等等。


【温馨提示】:

德尔塔(Delta)供应的产品仅用于科研,不能用于人体治疗、药物开发、和其他商业用途,如有购买方或第三方采购我公司的产品用于治疗、药物开发或商业用途,购买方或第三方将承担所有法律责任,我公司也将追究其法律责任。以上产品均可定购。


【运输说明】:


极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。

低温产品:低温产品运输过程中加装冰袋运输。

常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。


【目前合作的部分科研单位】:

重庆医科大学,西南大学,第三军医大学,西南交通大学,重庆大坪医院,四川大学,华西医院,电子科技大学,哈尔滨工业大学,吉林大学,长春应化所,沈阳药科大学,中国海洋大学,北京大学,清华大学,北京理工大学,北京师范大学,北京中医药大学,中国农业大学,北京市肿瘤防治研究所,北京军事医学科学院,中国科学院动物研究所,中国科学院化学研究所,第四军医大学,西安交通大学,湖南大学,中南大学,武汉大学,武汉协和医院,华中科技大学,中山大学,广东药科大学,深圳大学,华南理工大学,中国科研学院先进技术研究院,厦门大学,福州大学,浙江大学,南京大学,南京医科大学,东南大学,中国药科大学,苏州大学,山东大学,山东师范大学,上海交通大学,华东理工大学,复旦大学,郑州大学,河南烟草局,宁夏医科大学,新疆大学,中国人民大学,中国科学院苏州纳米研究所,国家纳米科学中心,武汉病毒研究所,中国科学院过程工程研究所,江苏省原子医学研究所,中国科学院宁波材料技术与工程研究所,中国科学院上海硅酸盐研究所,中国医学科学院生物医学工程研究所等等

 

【目前合作过的药厂】:

石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司,西安力邦制药有限公司,上海药明康德新药开发有限公司,安徽省国平药业有限公司,苏州亚盛药业有限公司,兆科药业(合肥)有限公司,南京绿叶制药有限公司,山东绿叶制药有限公司,大冢(上海)药物研究开发有限公司,国药集团化学试剂有限公司,长春金赛药业有限责任公司,成都苑东药业有限公司,浙江海正药业等。


【地  址】:陕西省西安市雁塔区含光南路与丁白路交叉口美苑楼尚20F

【联  系】:张经理

【电  话】:18133906270

【邮  箱】:1525990437@qq.com

【网  站】:http://www.delta-f.com/
库存查询