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DNA测序技术的现状和发展（中）
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
2. 用于处理新一代测序技术数据的软件和标准 各种新一代测序仪的飞速发展面临着一个极其重要的问题，那就是生物信息学问题，这些问题包括序列质量评分（sequence quality scoring）问题、序列比对问题、序列组装问题、数据发布问题等。下面将逐个进行讨论。 2.1 序列质量问题 目前，序列质量评分问题是受到广泛关注的一个问题。造成这种现象的原因主要是因为所有新一代测序仪的测序质量都不高，而且不同的序列情况都有各自的误差率。随着新一代测序仪产品的不断成熟，在临床及科研工作中的应用范围越来越广，它们的测序质量也就变得重要起来，而且我们也需要对各个测序仪的测序质量有一个清晰的、可靠的评价标准。由于这个问题还只是刚刚出现，所以我们有机会设立一个全球统一的、标准化的评价体系对目前现有的以及将来即将出现的测序仪进行评价。我们希望避免再次发生类似过去几个芯片厂家之间进行数据比较的尴尬局面。对于测序仪的应用范围进行标准化的质量评价也是有好处的。比如评价从头测序的质量、评价测序结果与参考序列的相似度、评价测序仪发现突变以及多态性的能力以及对测序仪在进行大规模测序项目研究时的质量可靠性进行评价等。表7列出了几项应该被重点评价的项目。 这些质量数据都应该以一种简单、标准化的方式包含在测序结果中。现在所有的测序仪器生产商也都在他们的测序报告中加入了测序质量信息，消费者可以借此对数据进行交叉比较，甚至还有可能各取所长，将不同测序仪的测序结果整合起来，获得最佳的测序结果。目前，旨在从短片段测序结果中发现多态性以及突变位点的重测序项目经常会依靠“主要投票机制（majority voting scheme）”。该方法易于操作，但是容易出错，假阴性率较高。诸如Brockman小组和Quinlan小组开发的，更多更好的用于发现单核苷酸多态 性的方法是将误差率与单个碱基信号联系起来，即误差率与测序质量和序列内容相关，这样就能获得更准确的结果。我们估计，像phred样质量值之类
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DNA测序技术的现状和发展（下）
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
2.1.3 剪切后的短片段作图软件包 要将RNA的逆转录片段cDNA重新定位到基因组当中需要更加复杂的专业化算法。要将不同外显子经过剪切拼接之后生成的RNA短片段重新定位到基因组中和将一个外显子生成的RNA短片段重新定位到基因组中是完全不一样的（图14）。 在RNA逆转录产物cDNA的定位操作中用到的诸如ERANGE（http://woldlab.caltech.edu/rnaseq）这类软件 包都会用到已知基因的外显子位置和内含子位置信息作为参考。这样，ERANGE软件包就能“横跨”多个外显子构建新的参考序列，然后再调用Maq程序或者 Bowtie程序将剪切后的RNA片段定位到参考序列中了。因为这种方法不能发现新的（人们未知的）剪切模式，所以有些科研人员就使用了一种“机器学习法 ”（machine learning method）来预测新的剪切模式。该方法借助现有的参考序列注释信息在统计模型（statistical model）上进行过演练。与此相反，TopHat软件包（http://tophat.cbcb.umd.edu）则不需要借助任何注释信息，它使用的 是Bowtie软件来发现包含有短片段的外显子，然后再将余下的短片段定位到前面发现的各种外显子连接体当中。还有一款程序G-Mo.R-Se（http://s.fr/externe/gmorse）使用的也是这种策略，不过它是借助RNA测序数据而不是 通过Bowtie软件来发现外显子的。 2.2 局限性及存在的问题 现有的用于短片段作图的方法都有其各自的局限性。比如，Maq和Bowtie软件在处理插入或缺失片段时就几乎不起作用。 有些软件，例如SHRiMP（http://compbio.cs.toronto.edu/shrimp，图15）就能支持ABI公司的“彩色空 隙（color space）”测序结果，但大部分软件都是不支持该结果的。剪切后短片段作图软件同样存在类似问题，而且它们还有自己的特殊问题。例如，基于注释信息的软件当然最多只能获得和注释信息相当的结果，但很多物种的全基因组注释信息都仅仅只是同源预测信息或计算机预测信息。如果“机器学习方法”受到错误的注释信息“操练”的话，也不会得出好结果。 因此，对于短
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从CB-MNCs中分离CD34+细胞
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
从CB-MNCs中分离CD34+细胞 试剂和材料： 1. 培养基； 2. 过柱缓冲液：pH7.2的PBSA，添加0.5%牛血清白蛋白和2mmol/L EDTA或0.6%枸橼酸葡萄糖A方（ACD-A）。用真空装置除去缓冲液中的气体； 3. FcR阻断剂； 4. CD34微球； 5. 柱子（MS+/RS+或LS+/VS+）； 6. 磁珠细胞分离仪（如MiniMACS）； 7. 尼龙过滤网，30μm； 实验方法： 1. 准备过柱缓冲液，用抽真空装置去除气体； 2. 每108个CB-MNCs用终体积300μl缓冲液重悬； 3. 每108个CB-MNCs悬液加100μlFcR阻断剂，抑制CD34微珠非特异性结合或通过Fc受体介导与非靶细胞的结合； 4. 每108个CB-MNCs悬液加100μlCD34微球进行细胞标记，充分混匀后在6-12℃冰箱放置30min； 5. 加PBSA洗，室温200g离心100min；加适量的缓冲液重选细胞； 6. 根据CB-MNCs的细胞总数选择合适的柱子类型（MS+/RS+或LS+/VS+），将柱子放入MACs分离仪的磁场中，加入缓冲液润洗柱子（MS+/RS+：500μl；LS+/VS：3ml）； 7. 用30μm尼龙过滤网过滤细胞，去除细胞团。使用前，用缓冲液湿润柱子； 8. 将细胞悬液加入柱子，使未结合的细胞通过柱子； 9. 用缓冲液将未结合的细胞洗去（MS+/RS+：3×500μl；LS+/VS：3×3ml）； 10. 洗脱结合的细胞； （1） 将柱子从分离仪中移出； （2） 置于合适的管中； （3） 将柱子加满缓冲液（MS+/RS+：1ml；LS+/VS：5ml）； （4） 用柱子随带的内塞，加压将结合的细胞冲洗出来； 11. 加PBSA将CD34+细胞洗一遍，室温200g离心10min。用适当的培养基重悬细胞；
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BrdU标记法检测原代细胞增殖
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
BrdU标记法检测原代细胞增殖 1．细胞以1.5×105/ml细胞接于直径35ml培养皿中（内放置盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝数细胞处于G0期 2．终止细胞培养，加入BrdU（终浓度30μg/L），37℃，孵育40min。 3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。 4．甲醇/醋酸固定10min。 5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。 6．5％正常兔血清封闭。 7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。 8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。 9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。
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用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
一种用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法 来源：方统科技 ---------------------------------------------------------------------------------- 摘要： 本文介绍了一种用于PCR的植物基因组DNA的快速制备方法。该方法只需将少量(4～6mg)植物叶片、适量(200μl) TE缓冲液、和一粒钨合金珠放入离心管，在组织细胞研磨器中振动5min破碎组织后，直接取1μl DNA溶液作为PCR的模板。本方法具有简单快速、成本低、扩增效果好等优点，特别适合于大量样品的基因型检测。 王兰1, 2 龙云铭2 刘耀光2 1 华南农业大学农学院，广东省植物分子育种重点实验室 2 华南农业大学生命科学学院，广东省教育厅植物功能基因组与生物技术重点实验室 摘要：本文介绍了一种用于PCR的植物基因组DNA的快速制备方法。该方法只需将少量(4～6mg)植物叶片、适量(200μl) TE缓冲液、和一粒钨合金珠放入离心管，在组织细胞研磨器中振动5min破碎组织后，直接取1μl DNA溶液作为PCR的模板。本方法具有简单快速、成本低、扩增效果好等优点，特别适合于大量样品的基因型检测。 关键词: 水稻，DNA制备，PCR 随着生物技术的迅速发展，PCR技术已广泛应用于遗传育种的各个领域，如种子纯度鉴定、亲缘关系的分析、分子标记辅助育种、基因定位以及转基因植株检测等。在大规模的基于PCR的基因型检测作业中，高效快速的模板DNA制备显得非常重要。自Marmur 1961年建立用十二烷基磺酸钠(SDS)和氯仿从生物细胞中分离提取DNA样品的经典方法以来,人们一直致力于对DNA抽提方法的探讨，并先后报道了一些关于DNA抽提的方法（Dellaporta et al., 1983; 宣朴等，1998；汪秀峰等，2002；周淑芬等，2004）。但这些方法仍然烦琐费时。本研究对作为PCR模板的植物基因组DNA制备方法作了简化,只需将少量叶片、适量TE缓冲液、和一粒钨合金珠放入离心管，在组织细胞研磨器中振荡约5min破碎组织后，直接取1μl DNA溶液作为PCR的模板。本方法具有简单快速、成本低、扩增效果好等优点，特
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提取动物组织DNA的方法
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
【实验步骤】 1．组织块解冻，用生理盐水洗去血污，剪取约0.5g组织，剪小放入2.0ml离心管中，用FM-200P研磨45秒； 2．加入0.45ml TES混匀，再加入50ul SDS（10%），5.0ul蛋白酶K（20mg/ml），充分混匀后，于56°C保温4-6h，每2h摇1次。 3．放置到室温，加入等体积饱和酚（500ul），颠倒混匀，10000r/m，离心10m，分离水相和有机相，小心吸取上层含核酸的水相，到一个新的1.5ml离心管。 4．加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层转移到新的1.5/2.0ml离心管中; 5．加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层清液到一个新的1.5/2.0ml离心管; 6．加入2.5倍体积的-20°C预冷的无水乙醇沉淀DNA，观察现象。 7．12000 r/m，离心10分钟，弃乙醇; 8．-20°C保存的75%乙醇洗涤，10000 r/m，离心5分钟，去乙醇，55°C干燥DNA; 9．加入适量TE溶解DNA（具体依DNA的多少而定），-20°C保存备用; 【注意事项】 1．抽提每一步用力要柔和，防止机械剪切力对DNA的损伤。 2．取上层清液时，注意不要吸起中间的蛋白质层。 3．乙醇漂洗去乙醇时，不要荡起DNA。 4．离心后，不要晃动离心管，拿管要稳，斜面朝外。
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离心机电机轴承的发热问题
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
众所周知，离心机的轴承是很重要的一部分，一般有经验的离心机高手在购买离心机的时候都问询问厂家关于轴承的一系列问题。 今天主要说说离心机轴承发热的问题，轴承发热缘由有几种，要细致情况细致分析，有可能是由于过载或者超载，有可能是散热风扇等现问题，还有可能是由于机械摩擦产生的热量，但主要问题是轴承能否正宗，有的用户为了低价而置办低价轴承，从而产生轴承发热，发烫，以致呈现轴承烧毁等等现象。因此首先强调要置办正宗（进口）轴承。第二，要留意坚持机械的润滑，选用优质高温锂基脂，锂基脂的好差也是轴承发热的另一个主要缘由。另外要以你细致的情况检查，假设是机械摩擦会伴随噪音，机械部件会有明显的磨损你说轴承有松动，那就应该是轴承呈现问题，需求改换轴承。建议置办正宗进口轴承。 离心机是属于高转速化工设备，高转速就需求用到好的轴承，优质正宗的轴承可以保证离心机的长期正常运转，运用寿命以致长达10多年。第三，离心机主轴同心度能否准确，正常情况下人们不太留意同心度，主轴同心度倾向大很容易构成轴承发热。 当然在这里分析了是主要的原因，还有一些原因就是要靠用户自己平时多加小心了。
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10种常见的水处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
1. 沉淀过滤法 这是一种最原始的过滤方法，它是依靠水中微粒杂质的自身重量下沉来达到分离的目的。常用于水中杂质颗粒较大的场所，如江河湖水的初步自然澄清过滤。 2. 蒸馏法 蒸馏法是把水加热，变成气体，分出混入气相中的低沸点成分或飞沫成分，低沸点气体放于大气中。不挥发性不纯物残留于液相中，成为浓缩液排出。如此把水精制成高纯度的水。 此法耗电耗水量很大，且使用时需有人看守，使用不方便，现已较少使用。 3. 薄膜微孔过滤（MF）法 薄膜微孔过滤法包括三种形式：深层过滤、筛网过滤、表面过滤。 深层过滤是以编织纤维或压缩材料制成的基质，利用隋性吸附或是捕捉方式来留住颗粒，如常用的多介质过滤或砂滤；深层过滤是一种较为经济的方式，可去除98%以上的悬浮固体，同时保护下游的纯化单元不会被堵塞，因此通常做为预处理。 表面过滤则是多层结构，当溶液通过滤膜时，较滤膜内部孔隙大的颗粒将被留下来，并主要堆积在滤膜表面上，如常用的PP纤维过滤。表面过滤可去除99.9%以上的悬浮固体，所以也可作为预处理或澄清用。 筛网滤膜基本上是具有一致性的结构，就象筛子一般，将大于孔径的颗粒，都留在表面上（这种滤膜的孔量度是非常精准的），如超纯水机终端使用的用点保安过滤器；筛网过滤微孔过滤一般被置于纯化系统中的最终使用点，以去除最后的残留微量树脂片、碳屑、胶体和微生物。 4、活性炭吸附法 活性炭依靠吸附和过滤作用主要去除水中的异色、异味、余氯、残留消毒物等有机物杂质。 5. 电渗析 渗析是一种物理现象。如将两种不同浓度的盐水，用一张渗透膜隔开，浓度高的盐水中的溶质如无机盐离子通过膜向浓度低的盐水中渗透，这个现象就是渗析。这种渗析是由于含盐量浓度不同而引起的，称为浓差渗析。因为是以浓度差作为推动力，扩散速度始终是比较慢的。如果要加快这个速度，就可以在膜的两边加一直流电极。电解质在电场的作用下，会加快迁移的速度，这就称为电渗析。 电渗析耗电量大，且渗析
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变压吸附（PSA）制氮浅析
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
变压吸附（PSA）制氮浅析 工作原理 市场上目前的供氮方式主要有液氮、瓶装氮、现场制氮。综合三种供氮方式，现场制氮是目前最经济、高效、节能的的一种供氮方式。现场制氮适合于用气量在1000 Nm3/h以下的用户。现场制氮的一种主要方式即是变压吸附（Pressure Swing Adsorption，PSA）制氮机。PSA制氮的原理主要是基于碳分子筛（Carbon Molecular Sieving,，CMS）对氧和氮的吸附速率不同，碳分子筛优先吸附氧，而氮大部分富集于不吸附相中。CMS是一种以煤为主要原料经过特殊加工而成的，黑色表面充满微孔的颗粒，是一种半永久性吸附剂（可再生使用）。它对氧和氮的分离作用主要基于这两种气体在碳分子筛表面上的扩散速率不同，O2动力学直径较小，气体分子扩散较快，较多地进入分子筛固相（微孔），N2动力学直径较大，气体分子扩散较慢，进入分子筛固相较少，这样在气相中就可得到氮的富集成份。因此利用CMS对O2和N2在某一时间内吸附量的差别这一特性，按特定的程序，结合加压吸附、减压脱附的快速循环过程（变压吸附），完成氧-氮分离，从而在气相中获得高纯度的N2。PSA制氮具有经济、高效、运行成本低、适应 性强、易于操作、安全方便等特点。由于CMS有一定的吸附容量，当吸附饱和时就需要再生，所以单吸附塔的吸附是间歇式的，为保证连续供气，采用双吸附塔并联交替进行吸附，一塔工作一塔再生，连续产生N2。 CMS对O2、N2的吸附特性 注：随着吸附压力的增加，O2、N2的吸附量都增加，但是O2的吸附增加量远远高于N2。 工艺流程 空气经空气过滤器清除灰尘和机械杂质后进入空气压缩机，压缩至所需压力，经严格的除油、除水、除尘净化处理，输出洁净的压缩空气，目的是确保吸附塔内分子筛的使用寿命。装有碳分子筛的吸附塔共有二个，一个塔工作时，另一个塔则减压脱附。洁净空气进入工作吸附塔，经过分子筛时氧、二氧化碳和水被其吸附，流至出口端的气体便是N2及微量的氩和氧。另一塔（脱附塔）使已吸附的
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原代细胞周期测定的原理和BrdU方法
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
原代细胞周期测定的原理和BrdU方法 原理: 细胞周期:细胞一世代所经历的时间从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现采用其他方法测群体周期。 测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计法等。 BrdU（5溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。 试剂 1、仪器、用品：同常规细胞培养 2、试剂：BrdU（1.0mg/ml），甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2×SSC液 BrdU方法 1、原代细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，最终浓度为10μg/ml。 2、44小时加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。 3、48小时后常规消化细胞至离心管中，注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。 4、常规染色体制片。 5、染色体玻片置56℃水浴锅盖上，铺上2×SSC 液，距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟。 6、弃去2×SSC液，流水冲洗。 7、Giemsa液染色10分钟，流水冲洗，晾干。 8、镜检100个分裂相，计第一、二、三、四细胞期分裂指数。 9、计算：细胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小时） 附： （1）BrdU配制：BrdU 10mg十双蒸水10ml 4℃下避光保存。 （2）2×SSC配制：NaCl 1.75克，柠檬酸三钠•2H2O 0.88克，加水至100ml，4℃保存。
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体外三维基质中原代CD34+细胞的扩增
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
体外三维基质中原代CD34+细胞的扩增 试剂和材料： 1. 培养基：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的IMDM，添加1%牛血清白蛋白，10μg/ml胰岛素，0.1mmol/L 2-巯基乙醇，50U/ml青霉素和50μg/ml链霉素； 2. 48孔培养板； 3. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA； 4. 纤维粘连蛋白（fibronectin）包被的细胞基质支架； 5. 细胞因子（干细胞因子，IL-6，IL-3，Flt-3配体）； 实验方法： 1. 用含细胞因子的培养基重悬细胞（100ng/ml干细胞因子，20ng/ml IL-6，20ng/ml IL-3和100ng/ml Flt-3配体）； 2. 将2.5×105 CD34+细胞/ml接种到纤维粘连蛋白包被的48孔培养板； 3. 每周两次半量更换新鲜培养基； 4. 两周后收集细胞； （1）250g离心10min，从三维细胞基质支架中收集非贴壁的细胞； （2）贴壁的细胞用0.05%胰蛋白酶/EDTA孵育细胞基质，37℃孵育30min，随后250g离心10min；
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饲养层细胞共培养体外扩增原代CD34+细胞
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
饲养层细胞共培养体外扩增原代CD34+细胞 试剂和材料： 1. MSCs培养基； 2. 6孔培养板； 3. 丝裂霉素C，100μg/ml； 4. 共培养的培养基：IMDM添加10%FBS，100U/ml青霉素和100μl/ml链霉素； 5. 细胞因子（干细胞因子，IL-6，Flt-3配体，促血小板生成素）； 实验方法： 1. 将脐带血来源的间充质干细胞（CB-MSCs）作为饲养层细胞，用MSCs培养基重悬CB-MSCs，细胞浓度为5×104个细胞/ml； 2. 将CB-MNCs接种到6孔板； 3. 每周两次半量更换新鲜培养基； 4. 当CB-MNCs达到90%以上汇合时，用10μg/ml丝裂霉素C处理，37℃ 2.5h； 5. 用无血清IMDM将CB-MNCs洗两遍； 6. 按1×104/ml CD34+细胞重悬于含细胞因子的共同培养基（100ng/ml干细胞因子，100ng/ml IL-6，50ng/ml Flt-3配体，10ng/ml促血小板生成素）； 7. 将CD34+细胞接种到CB-MSCs饲养层细胞上； 8. 每周两次更换1/4培养基； 9. 2周后，收集未贴壁细胞；
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深冷法制氮与变压吸附（PSA）法制氮比较
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
深冷法制氮与变压吸附（PSA）法制氮比较 随着工业的迅速发展，氮气在化工、电子、冶金、食品、生物、医药等领域获得了广泛的应用，氮气的需求量逐年大幅增加。氮气的化学性质不活泼，在平常状态下表现为很大的惰性，不易与其他物质发生化学反应。因此，氮气在电子、化工、食品、生物、医疗中广泛的用来作为保护气和密封气，一般保护气的纯度要求为99.99%，有的要求99.998%以上的高纯氮。液氮是一个较方便的冷源，在食品、医疗、生命科学等方面得到越来越普遍的应用。 纯净的氮气无法从自然界直接汲取，但是可以通过分离空气获得。现有的空气分离氮气方法包括：深冷法、变压吸附法(PSA)、膜分离法。本文主要讨论深冷法和PSA法制氮。 原理 PSA法制氮是以空气为原料，以碳分子筛（CMS）作为吸附剂，运用变压吸附原理，利用碳分子筛对氧和氮的选择性吸附而使氮和氧分离的方法。空气经空气过滤器清除灰尘和机械杂质后进入空气压缩机，压缩至所需压力，经严格的除油、除水、除尘净化处理，输出洁净的压缩空气，目的是确保吸附塔内分子筛的使用寿命。装有碳分子筛的吸附塔共有二个，一个塔工作时，另一个塔则减压脱附。洁净空气进入工作吸附塔，经过分子筛时氧、二氧化碳和水被其吸附，流至出口端的气体便是氮气及微量的氩和氧。另一塔（脱附塔）使已吸附的氧气、二氧化碳和水从分子筛微孔中脱离排至大气中。这样两塔轮流进行，完成氮氧分离，连续输出氮气。PSA制取的氮气纯度为95%-99.9%，假如再经过氮气净化设备处理，得到的高纯氮气纯度可达99.9995%。目前PSA制氮最大的生产能力为3000 Nm3/h。 深冷法制氮是一种传统的制氮方法，已有近几十年的历史。它是以空气为原料，利用液氧和液氮的沸点不同（在1大气压下，O2的沸点为-183℃，N2的为-196℃），通过液态空气的精馏，使它们分离来获得纯氮，同时也可以获得纯氧。空气经空气过滤器清除灰尘和机械杂质后进入空气压缩机，压缩至所需压力，然后送
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ELISA的概念、原理、操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 (一) 原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。 (二) 操作步骤 方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。 2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。 4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。 5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“ "、“-"号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性
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金属套玻璃高效雾化器检验规程及标准
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
金属套玻璃高效雾化器检验规程及标准 火焰原子吸收光谱分析用 一. 检验工具： 空气流量计、压力表、原子吸收光谱仪、无油空气压缩机、乙炔气、秒表、量筒（10mL）、蒸馏水（或纯净水）、Cu标液。 二. 检验规程及标准： 1. 取出雾化器，检查外观：玻璃部分不应有损坏和裂纹，金属焊接部分光滑没有沙眼， 钢针及其它粘接部分牢固，钢针没有弯曲和松动现象，尾部侧面不可有漏气现象。所配进液毛细管（共5支）是否齐全。 2. 将气源管与雾化器进气支管连接好，拧紧锁紧螺帽，不可有漏气现象。将空压机输出压力调整至原子吸收生产厂家设计规定的压力。 3. 空气流量的检查：用我公司提供的检查装置接上雾化器，用右下开关调整压力至原子吸收厂家设定压力，此时再看流量计，应为原子吸收厂家设定数值，上下出入在5％为合格。如不合格请送回厂家更换，用户无法调整。 4. 打开气源，将取样管插入蒸馏水中，将雾化器用手拿着使空气支杆方向与在原子吸收上的实际进气方向相同，吸喷蒸馏水，看喷雾状态，应散开后向前喷，散开面应大于8cm，雾应从3400（除去撞击球支杆位置约200）范围向外喷出，各个方向喷出量应基本相同。如喷雾角度或雾化不好：可转动撞击球角度，必须拿住撞击球根部(有胶圈部位)转动，否则容易造成连接支杆的折断，撞击球可在连接杆下方90度角内任意调节，（保证撞击球支杆在下方，使水珠可顺利排出），并将撞击球顶紧雾化器喷口，看喷雾状态，至满意为止。 5. 喷雾时雾化器发出的声音应一致，不可有突、突、突、突间断声音，如有间断声音请检查进样管是否插牢（插牢进样管排除）、进样管是否有破漏之处（更换进样管排除）。如仍不能排除，此雾化器为粘接不牢漏气，属不合格产品，由生产厂家更换。 6. 提升量的检查：将进样管插入10mL量筒内，量筒内灌入蒸馏水至刻线，测量提升量，从开始喷雾计算，一般情况雾化器的提升量在4-6mL/min，如提升量小了，可更换进样管，或剪短进样管（减小进样阻力），
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